哺乳动物骨髓染色体畸变试验方法与结果阳性判定

哺乳动物骨髓染色体畸变试验是一项体内遗传毒性检测方法，用于评价受试物经吸收、代谢后对啮齿类动物骨髓细胞染色体结构的损伤效应。

本文围绕试验对象与适用范围、动物分组与染毒设计、骨髓采集与制片、镜检判读、仪器条件、标准依据以及阳性结果判定等内容展开说明，为委托方在方案设计与结果解读阶段提供参考。

哺乳动物骨髓染色体畸变试验对象

该试验的检测对象是受试物在活体内诱导骨髓细胞中期染色体发生结构畸变的能力。

常见送检物包括食品添加剂、新食品原料、化妆品原料、农药原药与制剂、日用化学品、消毒产品以及药物候选物。

试验系统首选健康性成熟的啮齿类动物，小鼠和大鼠使用最多，骨髓因细胞更新快、分裂相丰富而成为取材组织。

检测终点覆盖染色单体型畸变与染色体型畸变两大类。

前者包括单体断裂与单体交换，后者包括断片、缺失、环状染色体、双着丝粒体与易位等。

在安全性毒理学评价程序中，本试验通常与细菌回复突变试验、微核试验组成评价组合，用于判断受试物有无致突变风险。

试验动物分组与染毒设计

动物经检疫适应后进入试验，一般选用小鼠或大鼠，雌雄各半，每组可分析动物数量需满足统计学要求。

试验设阴性对照组、阳性对照组以及至少三个受试物剂量组，阳性对照常选用环磷酰胺等已知断裂剂。

高剂量原则上取最大耐受剂量或限度剂量，限度剂量为2000 mg/kg体重/日，同时应避免动物出现严重毒性或死亡。

染毒途径首选经口灌胃，也可依据实际暴露方式选择腹腔注射或经皮途径。

染毒方案分单次染毒与连续多次染毒两类，末次染毒后的采样时间约为1.5个细胞周期，并常增设间隔约24小时的第二采样点。

剂量组数量、采样点多少与动物品系决定了试验规模，也是送检方核算费用的主要变量。

骨髓采集与染色体制片流程

采样前数小时，动物需腹腔注射秋水仙素或秋水仙酰胺，使骨髓细胞阻滞于分裂中期。

随后按既定时间点安乐处死动物，进入制片环节。

制片操作在洁净条件下连续完成，主要步骤如下：

剥离股骨并剪去两端，用生理盐水冲出骨髓腔内细胞； 离心收集细胞，以0.075 mol/L氯化钾溶液进行低渗处理； 以甲醇与冰醋酸按3:1配制的固定液反复固定； 将细胞悬液滴于预冷洁净载玻片上，自然干燥； 吉姆萨染液染色，晾干后封片备检。

低渗与固定效果直接决定染色体的分散度与形态清晰度。

制片不良会造成分裂相丢失或重叠，这类玻片应在镜检前剔除并重新制片。

镜检分析与畸变类型判读

阅片在油镜下进行，玻片经盲法编号后由分析人员独立读片，必要时安排双人复核。

每只动物通常分析不少于100个分散良好的中期分裂相。

分析时先核对二倍体数目是否正常，小鼠为2n=40，大鼠为2n=42，再逐相记录畸变类型。

判读环节中，裂隙单独统计，不计入畸变率；多倍体与内复制细胞另行记录。

除结构畸变外，每只动物还需计数约1000个细胞中的分裂相比例，即分裂指数，用于评估受试物对骨髓细胞的毒性抑制程度。

畸变细胞数与畸变类型分别汇总，构成统计与判定的原始数据。

仪器设备与环境条件

试验涉及的设备均为通用类型，包括生物显微镜与油镜镜头、显微成像及染色体分析系统、低速离心机、恒温水浴设备、分析天平以及动物解剖器械。

动物饲养区域需具备屏障设施，维持规定的温度、湿度与洁净度，保证试验期间动物状态稳定。

试剂方面，秋水仙素类阻滞剂、低渗盐溶液、固定液与吉姆萨染液需按规范配制，并在规定期限内使用。

玻片、载玻片清洗与染色条件的一致性，直接影响不同批次数据之间的可比性。

试验标准与技术规范

我国食品领域执行GB 15193.6—2015《食品安全国家标准 哺乳动物骨髓细胞染色体畸变试验》，对动物、剂量、采样与判定的技术要求作出了规定。

国际层面对应OECD化学品测试指南OECD TG 475，其2016年修订版更新了剂量上限与数据判定条款。

化妆品原料评价可参照《化妆品安全技术规范》（2015年版）中收载的体内哺乳动物骨髓细胞染色体畸变试验方法，农药登记则依据我国农药登记毒理学试验方法相关标准开展。

用于药品注册或涉及申报的检测时，试验一般应在符合药物非临床研究质量管理规范的条件下实施。

原始记录、玻片留存与数据归档需满足可追溯要求，以备评审与核查。

结果评判与阳性判定标准

一批数据可予采纳的前提包括两点：阴性对照组的畸变率落在实验室历史背景数据范围内；阳性对照组畸变率明显升高，能证明试验系统敏感。

任一前提不成立，本批数据即判为无效，需查明原因后重做。

阳性结果的判定依据包括两类情形。

其一，某一剂量组的畸变细胞率经统计学检验高于阴性对照，并超出历史背景数据范围。

其二，畸变率随剂量增加而升高，呈现剂量—反应趋势。

常用统计方法包括卡方检验、Fisher精确检验与趋势检验，统计学结论需与生物学意义结合判断。

当剂量相关性不明确，或仅个别剂量组出现边缘升高时，结果判为可疑，应调整剂量间距或采样时间后重复试验。

报告一般载明动物信息、染毒方案、各组畸变细胞数与畸变类型构成、分裂指数以及统计结论，供评价方审阅。

与体外染色体畸变试验区别

OECD TG 473对应的体外哺乳动物细胞染色体畸变试验，以离体培养细胞为材料，需分别设置加与不加代谢活化系统的处理条件，可在短期内完成大批量样品的初筛。

体内骨髓试验则覆盖吸收、分布、代谢与排泄的完整过程，更能反映受试物在整体状态下的遗传毒性表现。

两类试验观察终点相近而定位不同。

常规评价策略是先以体外试验初筛，阳性或存疑物质再进入体内试验确认。

与同属体内试验的微核试验相比，骨髓染色体畸变试验直接观察中期相的结构异常，信息维度更细；微核试验以微核率为终点，两者在组合评价中互为补充。

常见问题与解答

哺乳动物骨髓染色体畸变试验的检测费用主要受哪些因素影响？

费用与试验规模直接相关。

动物品系与数量、剂量组数目、采样点多少、对照品设置以及每只动物需分析的分裂相数量，共同决定饲养、染毒、制片与阅片的工作量，不同项目的报价因此存在差异。

哺乳动物骨髓染色体畸变试验结果存疑时如何复检？

剂量相关性不明确或仅个别剂量组边缘升高时，结果判为可疑，应调整剂量间距或采样时间后重复试验；对照数据不成立时本批结果无效，需查明原因重做。

对数据有异议，可调阅盲法阅片原始记录并安排双人复核。

哺乳动物骨髓染色体畸变试验的周期与报告交付包含哪些环节？

试验周期由动物检疫适应、染毒、两个采样点的间隔、制片、镜检分析与统计汇总等环节构成，具体时长以检测机构方案为准。

报告内容一般包括动物信息、染毒方案、各组畸变细胞数与畸变类型构成、分裂指数及统计结论。

重金属项目达标吗？鲜味能达到要求吗？湖北公布酱油测评结果

酱油作为千家万户餐桌上不可或缺的调味品，其鲜味强弱、质量等级以及食品安全指标直接影响着广大消费者的日常饮食品质与健康。

然而，面对市场上琳琅满目的酱油品牌以及“减盐”“零添加”“特级”等各式宣称，消费者在选购时往往感到困惑。

为了给消费者提供客观、直观的选购参考，近期，襄阳市消费者委员会组织开展了酱油商品比较试验，并委托湖北省产品质量监督检验研究院进行科学检测。

试验结果显示，40份样品的整体表现平稳，安全项目均符合国家标准限量要求，但从数据来看，同一品牌不同单品之间的鲜味差距较为显著。

40款样品覆盖17个标称品牌组 含海天厨邦李锦记等多个知名品牌 本次比较试验的样品由工作人员以普通消费者身份，从襄阳当地的各批发渠道随机购买。

对于此次比较试验，襄阳市消委会特别说明，比较试验并非监督抽检，不判定产品合格与否，也不给品牌进行排名，而是将每份样品的实测数据客观呈现，帮助消费者按照自身需求进行理性比较与选择。

据悉，本次样品共计40份，涵盖海天、厨邦、李锦记、千禾、味达美、六月鲜、东古、家乐、味事达、松鲜鲜、龙牌、佳隆、悦活里、应物有机、老谭味道、禾然有机、金葵等17个标称品牌组，单价从3元/瓶到30多元/瓶不等。

图源：襄阳市消保委。

图源：襄阳市消保委。

据了解，测试参考GB/T 18186-2000《酿造酱油》等相关标准及产品明示质量要求进行检测。

项目方案重点展示了氨基酸态氮、全氮、铵盐、可溶性无盐固形物等与风味相关的数据，以及苯甲酸及其钠盐、山梨酸及其钾盐、脱氢乙酸及其钠盐、防腐剂混合使用比例之和、糖精钠、三氯蔗糖、甜蜜素、铅、总砷等安全项目的实测记录。

综合检测结果显示，40份样品的整体表现平稳，安全项目均符合国家标准限量要求，但从数据来看，同一品牌不同单品之间的鲜味差距较为显著。

40款样品鲜味均达包装标示等级 厨邦海天等品牌组内单品鲜味相差超2倍 酱油的风味与质量等级紧密相关，其中氨基酸态氮是决定酱油鲜味的核心指标，由大豆等原料经发酵分解产生，数值越高通常意味着鲜味越足。

测试结果显示，40份样品的氨基酸态氮实测值介于0.52g/100mL至1.50g/100mL之间。

其中，有32份样品的实测值达到0.80g/100mL以上（即达到国标对特级酱油的鲜味门槛），另有3份低于0.60g/100mL，鲜味相对较淡。

氨基酸态氮按标称品牌分组对比。

逐份对比发现，本次40份样品中，标称特级25份、一级9份、二级3份、三级2份、未标示等级1份。

所有样品的鲜味实测值均达到了其包装标示的等级要求，未发现“标高等级、实测不够”的情况。

此外，从品牌与价格的交叉对比来看，同一品牌不同单品之间的鲜味差距较为显著。

例如在厨邦品牌组内，样品氨基酸态氮实测值跨度为0.63g/100mL至1.50g/100mL；海天品牌组内，样品实测值跨度为0.52g/100mL至1.30g/100mL，单品牌样品组内最大差距均在2倍以上。

对此，襄阳市消保委表示，挑选酱油不能只认品牌，价格高低与鲜味强弱并没有必然的对应关系，认准具体单品和标签上的指标更为可靠。

佳隆全氮均值领先而龙牌铵盐占比低 海天李锦记红烧老抽固形物数值显著较高 除了鲜度（氨基酸态氮）之外，全氮、铵盐和可溶性无盐固形物等指标也是衡量酱油发酵工艺与风味特征的重要参考。

据了解，全氮反映的是酱油中蛋白质、氨基酸及肽等含氮物质的总量，代表了产品发酵的“底子”是否厚实。

根据对比数据，本次样品的全氮均值普遍在1.08g/100mL至1.97g/100mL之间。

其中佳隆（1.97g/100mL）、家乐（1.85g/100mL）、松鲜鲜（1.80g/100mL）及东古（1.79g/100mL）等品牌样品的全氮平均实测值相对偏高；而海天（组内跨度0.85~2.12g/100mL）、厨邦（0.96~1.80g/100mL）和李锦记（1.07~1.68g/100mL）等品牌组由于涵盖了不同等级与用途的多款单品，组内样品间的全氮数值跨度也较为明显。

全氮按标称品牌分组对比。

铵盐属于酱油发酵过程中的自然副产物，用于考察发酵过程及制曲条件的控制水平，通常以不超过氨基酸态氮的30%为宜。

根据数据分析，本次40份样品的铵盐占氨基酸态氮比例介于8%至25%之间，所有样品均处于30%以内的合理参考范围内。

其中，龙牌酿造酱油（8%）、味事达极鲜鲜味极靓酱油（9%）、厨邦鲜味酱油（10%）以及一品鲜酿造酱油（11%）等单品的铵盐占比相对较低；而李锦记蒸鱼豉油（25%）与有机鲜味特级酿造酱油（25%）、海天黑豆0金标生抽（23%）以及禾然有机黑豆酱油（23%）等单品的铵盐占比则相对偏高。

铵盐按标称品牌分组对比。

可溶性无盐固形物是指除水和食盐外溶解在酱油中的其他物质总量，数值越高通常代表口感更加醇厚。

数据显示，老抽及红烧类产品因生产工艺特点，该数值天然偏高。

例如海天红烧酱油（48.15g/100mL）、李锦记草菇老抽（39.40g/100mL）以及海天厚蒸生抽/薄盐生抽等红烧老抽类单品的可溶性无盐固形物实测值均处于较高水平。

可溶性无盐固形物按标称品牌分组对比。

从品牌平均来看，佳隆（29.18g/100mL）、李锦记（28.81g/100mL）和千禾（28.62g/100mL）等品牌组的平均实测值相对偏高；而应物有机（5.36g/100mL）、味事达（7.89g/100mL）、家乐（7.93g/100mL）以及松鲜鲜（8.85g/100mL）等品牌样品的平均实测值则相对偏低，单品中海天黄豆酱油实测值较低（9.64g/100mL），整体呈现出不同品类与用途带来的显著口感特征差异。

40款样品安全项目全部在国标限量内 部分海天厨邦龙牌样品检出微量山梨酸与三氯蔗糖 在消费者关心的食品安全项目测试中，40份样品均表现出良好的安全性，所有检出数据均在国家标准规定的允许限量范围内。

具体来看，在苯甲酸（防腐剂）、糖精钠（甜味剂）、脱氢乙酸（防腐剂）、甜蜜素（甜味剂）以及重金属总砷5个项目测试中，40份样品的检测报告记录均为“未检出”。

在防腐剂和甜味剂项目上，山梨酸（防腐剂）在12份样品中有数值记录，实测值介于0.422g/kg至0.619g/kg之间（国家标准限量为1.0g/kg）。

其中，海天黄豆酱油（0.619g/kg）、龙牌酱油（0.593g/kg）以及厨邦金标生抽（0.591g/kg）等样品的山梨酸实测值相对偏高，最高值约为限量的62%。

三氯蔗糖（甜味剂）在15份样品中有数值记录，实测值介于0.0318g/kg至0.219g/kg之间（国家标准限量为0.25g/kg）。

其中，海天金标生抽（酿造酱油）（0.219g/kg）、厨邦味级鲜（0.195g/kg）以及厨邦美味鲜酱油（0.185g/kg）等样品的实测数值相对偏高，最高值约为限量的88%。

在防腐剂混合使用比例之和方面，有数值记录的12份样品均值约为0.536，实测数值介于0.422至0.619之间。

其中，最高值为0.619（海天黄豆酱油），其次为龙牌酱油（0.593）和厨邦金标生抽（0.591），整体距离国家标准限值“1”均留有较大余量。

在重金属污染物项目上，铅在11份样品中有数值记录，实测值介于0.042mg/kg至0.095mg/kg之间（国家标准限量为调味品1.0mg/kg）。

其中，海天特级金标生抽（0.095mg/kg）、李锦记精选生抽（0.083mg/kg），以及厨邦酱油（0.076mg/kg）等样品的实测数值虽相对较高，但最高值约为限量的9.5%左右，远低于标准限量要求。

针对测试结果，襄阳市消委会特别进行科普：“未检出”是指含量低于检验仪器的检出限，并非绝对不含；而“检出”或“有数值记录”仅代表仪器测到了微量数值，绝不等于“超标”或“不合格”。

合规防腐剂在国标限量内使用可以防止酱油酸败变质，有利于食品安全；只要实测值不超过国家标准限量，即符合食品安全要求。

消委会建议按烹饪场景选购酱油 勿盲目追捧高价或“零添加”概念 结合本次比较试验的数据与结果，襄阳市消费者委员会为广大消费者给出了具体的选购与使用指引。

首先认准“酿造酱油”标识。

根据相关食品安全国家标准，自2019年12月起，只有采用传统酿造工艺生产的产品才能命名为“酱油”，调配产品只能命名为“复合调味料”。

其次看清质量等级与氨基酸态氮。

酱油包装上必须标示质量等级和氨基酸态氮含量，同价位产品可优先选择等级高、数值高的单品。

如果用于蘸食、凉拌等追求提鲜的场景，可优先选择氨基酸态氮较高的产品；如果是用于红烧、焖炖等看重上色和醇厚口感的场景，可选择可溶性无盐固形物较高的老抽类产品，氨基酸态氮稍低的产品同样适用。

同时细读配料表与宣称。

配料按加入量由多到少排列，苯甲酸、山梨酸为防腐剂，三氯蔗糖、糖精钠为甜味剂，谷氨酸钠等为增鲜剂。

对于标注“薄盐”“减盐”“零添加”的产品，应结合营养成分表中的钠含量及配料表综合判断，不必盲目为包装和概念多花钱。

最后注意开封后的妥善保存。

购买后应按标签要求贮存，开封后注意密封、避光并保持环境卫生；若发现胀袋、渗漏、异味或明显性状变化，不宜继续食用，并应妥善保留购物凭证以保障自身合法权益。

采写：南都·湾财社记者 邱康正

科学家模拟调暗太阳推演，结果远比想象更糟

当涉及决定这颗星球的命运时，科琳·戈尔贾一直认为科学与理性应当占有一席之地。

直到去年九月在伦敦的一个清晨，这位气候研究员参加了一系列推演中的第一场。

其目标是：防止世界各国在一项旨在为地球降温、却伴随着巨大未知风险、可能重塑地球生命的技术上展开失控的全球竞赛。

"我原以为这会是件很容易的事。

比如说，我们都能就进行符合伦理的研究达成一致，确保这项技术造福全人类，"她告诉《连线》杂志。

"结果，我大错特错了。

" 这场名为"探索地缘政治临界点与气候降温策略"的模拟推演，汇聚了来自世界各地的数十位外交关系专家、科学家、军事人员和前政府官员，齐聚伦敦玛丽女王大学的一间会议室。

在喝咖啡、吃小份酸奶进行完自我介绍后，与会者围坐在排成正方形的桌子旁，每人面前都摆放着自己所扮演角色的名称牌：国家政府、气候类非政府组织和非营利机构、原住民团体，以及科技公司。

戈尔贾被指派担任技术顾问，协助与会者做出具有科学依据的决策。

这场推演的目的是对世界应对一类名为"太阳辐射管理"的前瞻性技术组合的反应进行压力测试。

这些技术承诺通过反射一部分到达地球的太阳光来逆转全球变暖，例如向大气层中喷洒二氧化硫颗粒或其他人造物质。

这种太阳能地球工程的降温效果已被广泛认可，它会模拟大型火山喷发的已知影响——后者会使地球暂时降温半摄氏度甚至更多。

但其后续影响却更加不确定，而且分布也并不均匀：模型预测撒哈拉以南非洲地区会出现干旱加剧，大西洋地区会出现更强烈的热带风暴。

这种降温效果也只能持续到地球工程持续进行期间；一旦停止，全球气温可能会急剧反弹，带来难以预测的剧烈影响。

直到不久前，太阳辐射管理的想法还只是气候科学中一个充满推测性的小众领域。

但这种情况正在迅速改变。

私营企业正将太阳能地球工程视为一个商业机会加以探索：去年，一家美国以色列合资的初创公司星尘解决方案（Stardust Solutions）筹集了6000万美元资金，并于今年5月公布了一系列新发明的细节，声称这些发明将使人类能够按需调节全球气温。

今年8月，埃隆·马斯克——其旗下公司SpaceX可能成为实施地球工程干预措施的候选者之一——公开表态支持太阳能地球工程，他在X平台上写道："将需要用太空卫星来控制气温，以及大规模的地球工程，否则一切都将game over（游戏结束）。

" 世界将不得不比大多数政策制定者所设想的更快做出关于如何治理这项技术的决定，前联合国顾问辛西娅·沙尔夫告诉《连线》杂志。

"这不是15年后的事；很容易就会在未来十年内发生。

" 正是在这样的背景下，利兹大学国际关系学助理教授丹妮尔·杨组织了这场推演。

其设定是一个仓促召集的联合国委员会，负责协调国际社会对太阳能地球工程技术进展的应对。

整场推演围绕三个模拟时间点展开的会议展开：现在、2027年9月和2028年9月。

每一个阶段都会提高赌注，推演设计者会引入反射阳光技术方面的新进展。

如同现实生活一样，没有人掌握全部事实，参与者必须对那些将世界推向全面部署太阳能地球工程技术边缘的事件做出回应，即便他们可能并未完全了解真实发生了什么——也不清楚其他人在做什么。

第一场会议便奠定了整体基调。

不信任与虚假信息占据了主导地位。

当与会者讨论关于户外实验的规则、试图达成一项国际协议时，分别扮演美国和中国的玩家都向小组表示，他们不能签署任何会限制本国追求被视为符合"国家利益"的研究的协议。

他们也不能接受任何会让自己的超级大国竞争对手在技术上占据领先地位的协议。

在接受《连线》采访时，扮演美国国家安全专员角色的美国陆军少校杰弗里·尼尔森将这一立场总结为："比没有协议更糟的，是任何偏向中国的协议。

" Q&A Q1：什么是太阳辐射管理技术？ A：太阳辐射管理是一类旨在通过反射部分阳光来降低地球温度的技术，例如向大气层喷洒二氧化硫颗粒等物质，其效果类似于大型火山喷发带来的降温作用。

Q2：太阳能地球工程会带来什么风险？ A：该技术虽然能降温，但影响并不均衡。

模型显示它可能导致撒哈拉以南非洲地区干旱加剧，大西洋地区热带风暴增强。

此外一旦停止实施，全球气温可能急剧反弹，带来难以预测的后果。

Q3：这次伦敦推演模拟了什么内容？ A：推演模拟了一个联合国委员会应对太阳能地球工程技术发展的过程，设置在现在、2027年和2028年三个时间点，测试各国在信任缺失和信息不对称的情况下能否就相关国际规则达成一致。